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      應用案例
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      應用視界丨效率提升3000倍!DREM cell解鎖土壤“沉默基因庫”

      來源:   作者: 發布日期:2025-04-24 訪問量:76

      引言:

      傳統方法之困——99%的微生物資源為何“不可見”?傳統微生物篩選依賴平板培養,但面臨兩大瓶頸:

      ?效率低下:單次實驗僅能篩選數百菌株,耗時數月;

      ?“稀有菌盲區”:95%的微生物因豐度低、生長慢被忽視,成為“沉默基因庫”。

      本次研究由貴州大學與清華大學科研團隊聯袂主導,貴州大學李祝研究員、魏龍鳳博士,攜手清華大學張翀教授團隊,將微生物學、農業生物工程、微流控技術與合成生物學領域的前沿深度融合,突破傳統培養瓶頸,3小時篩選30萬微生物,效率提升3000倍,并首次捕獲Lelliottia、Buttiauxella等稀有拮抗菌。

      1

      一、研究亮點

      本研究通過DREM cell設備(高通量皮升級液滴單細胞分選系統),成功從魔芋根際土壤中篩選出32株對軟腐病菌Ecc15具有顯著抑制效果的拮抗菌,其中菌株D-62的抑菌圈直徑達20.86mm,并在魔芋球莖實驗中驗證其生防潛力。研究對比傳統平板培養發現:

      1.多樣性優勢

      DREM cell液滴培養的物種豐富度(ACE指數)較平板高3倍,檢測到4,255個OTUs,涵蓋33個細菌門,其中95%屬于稀有生物圈(相對豐度<0.01%),包括Lelliottia、Buttiauxella等未報道的新資源。而平板培養僅獲得638個OTUs,集中在17個門,其中優勢菌(如Pseudomonas、 Acinetobacter )占比>80%。

      2.效率提升

      DREM cell單次篩選通量達3×105細胞/3小時,效率較傳統方法提升3000倍,培養基消耗降低1.2×107倍。

      3.成本優化

      DREM cell設備自動化減少了人工干預,基礎設施與耗材成本顯著下降。


      二、DREM cell如何賦能微生物研究

      1.液滴生成

      通過DREM cell液滴生成芯片生成14 pL均一液滴,基于泊松分布(λ~0.1)實現單細胞包被,單細胞包被率>90%,避免種間競爭,保留慢生長菌株。

      液滴作為獨立微反應器,液滴內培養基含土壤提取物(CESE),模擬自然環境,支持難培養微生物生長,成功培養出傳統方法無法檢測的稀有菌群(如Rhodococcus),拓寬資源庫。



      2

      2.液滴培養、檢測

      液滴在30°C培養3天,形成獨立微反應器,引入GFP標記的軟腐病菌(GFP-Ecc15)作為報告株,通過熒光信號實時監測拮抗活性(低熒光=抑菌)。

      3


      3.液滴分選

      通過DREM cell液滴分選芯片根據熒光強度篩選低信號液滴,富集拮抗菌,通量達3×105細胞/3小時。

      4

      4.功能驗證

      分選菌株通過瓊脂擴散法驗證抑菌圈,結合16S rRNA測序鑒定物種,并通過魔芋球莖感染模型評估生防效果。

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      三、技術對比


      多樣性分析:DREM cell液滴培養的α多樣性指數(ACE、Chao1)顯著高于平板(物種數提升3倍),檢測到33個細菌門(平板僅17個),稀有菌占比>95%(如Lelliottia、Buttiauxella等)。

      效率與成本:DREM cell篩選效率較傳統平板篩選提升3000倍,培養基消耗降低1.2×107倍,人力成本減少80%。微升級試劑消耗,單次實驗成本僅為傳統方法的萬分之一。

      6



      四、研究結果與結論

      1.研究結果


      從魔芋根際土壤中篩選32株拮抗菌,分屬9個屬(如Serratia、Bacillus),其中菌株D-62(Bacillus sp.)抑菌圈直徑達20.86 mm,顯著抑制魔芋軟腐病。DREM cell成功捕獲傳統方法未檢測的稀有菌(如Leclercia等),驗證液滴培養在微生物資源挖掘中的不可替代性。

      D-62預處理使魔芋球莖感染斑直徑降低60%,證實其田間應用潛力。

      2.研究結論


      DREM cell通過“單細胞包被-靶向分選-功能驗證”閉環,實現高通量、低成本、高靈敏度的拮抗菌篩選,為植物病害生物防治提供新策略,尤其適用于稀有微生物資源開發。


      關于DREM cell

      DREM cell是一款集液滴生成、液滴分選、液滴微注入及液滴打印的多功能、高通量、全自動設備,其結合液滴微流控技術和介電泳分選技術,由多光路熒光檢測系統、高速顯微成像系統、自動對焦載物臺、微全分析系統、介電泳分選系統、圖像監控系統和強大的數據處理系統組成。

      7


      關于我們

            天木生物專注于生物育種領域的高端儀器裝備的開發與應用,致力于通過高效的突變技術和高通量篩選技術,改造提升產業傳統菌種開發模式,為生物制造產業提質增效,提升我國生物產業的核心競爭力。 致力于為行業“細胞和菌種開發與篩選效率低”、“相關裝備成本昂貴”、“產業化落地困難”等難題提供優秀的解決方案。

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      引言:

      傳統方法之困——99%的微生物資源為何“不可見”?傳統微生物篩選依賴平板培養,但面臨兩大瓶頸:

      ?效率低下:單次實驗僅能篩選數百菌株,耗時數月;

      ?“稀有菌盲區”:95%的微生物因豐度低、生長慢被忽視,成為“沉默基因庫”。

      本次研究由貴州大學與清華大學科研團隊聯袂主導,貴州大學李祝研究員、魏龍鳳博士,攜手清華大學張翀教授團隊,將微生物學、農業生物工程、微流控技術與合成生物學領域的前沿深度融合,突破傳統培養瓶頸,3小時篩選30萬微生物,效率提升3000倍,并首次捕獲Lelliottia、Buttiauxella等稀有拮抗菌。

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      一、研究亮點

      本研究通過DREM cell設備(高通量皮升級液滴單細胞分選系統),成功從魔芋根際土壤中篩選出32株對軟腐病菌Ecc15具有顯著抑制效果的拮抗菌,其中菌株D-62的抑菌圈直徑達20.86mm,并在魔芋球莖實驗中驗證其生防潛力。研究對比傳統平板培養發現:

      1.多樣性優勢

      DREM cell液滴培養的物種豐富度(ACE指數)較平板高3倍,檢測到4,255個OTUs,涵蓋33個細菌門,其中95%屬于稀有生物圈(相對豐度<0.01%),包括Lelliottia、Buttiauxella等未報道的新資源。而平板培養僅獲得638個OTUs,集中在17個門,其中優勢菌(如Pseudomonas、 Acinetobacter )占比>80%。

      2.效率提升

      DREM cell單次篩選通量達3×105細胞/3小時,效率較傳統方法提升3000倍,培養基消耗降低1.2×107倍。

      3.成本優化

      DREM cell設備自動化減少了人工干預,基礎設施與耗材成本顯著下降。


      二、DREM cell如何賦能微生物研究

      1.液滴生成

      通過DREM cell液滴生成芯片生成14 pL均一液滴,基于泊松分布(λ~0.1)實現單細胞包被,單細胞包被率>90%,避免種間競爭,保留慢生長菌株。

      液滴作為獨立微反應器,液滴內培養基含土壤提取物(CESE),模擬自然環境,支持難培養微生物生長,成功培養出傳統方法無法檢測的稀有菌群(如Rhodococcus),拓寬資源庫。



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      2.液滴培養、檢測

      液滴在30°C培養3天,形成獨立微反應器,引入GFP標記的軟腐病菌(GFP-Ecc15)作為報告株,通過熒光信號實時監測拮抗活性(低熒光=抑菌)。

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      3.液滴分選

      通過DREM cell液滴分選芯片根據熒光強度篩選低信號液滴,富集拮抗菌,通量達3×105細胞/3小時。

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      4.功能驗證

      分選菌株通過瓊脂擴散法驗證抑菌圈,結合16S rRNA測序鑒定物種,并通過魔芋球莖感染模型評估生防效果。

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      三、技術對比


      多樣性分析:DREM cell液滴培養的α多樣性指數(ACE、Chao1)顯著高于平板(物種數提升3倍),檢測到33個細菌門(平板僅17個),稀有菌占比>95%(如Lelliottia、Buttiauxella等)。

      效率與成本:DREM cell篩選效率較傳統平板篩選提升3000倍,培養基消耗降低1.2×107倍,人力成本減少80%。微升級試劑消耗,單次實驗成本僅為傳統方法的萬分之一。

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      四、研究結果與結論

      1.研究結果


      從魔芋根際土壤中篩選32株拮抗菌,分屬9個屬(如Serratia、Bacillus),其中菌株D-62(Bacillus sp.)抑菌圈直徑達20.86 mm,顯著抑制魔芋軟腐病。DREM cell成功捕獲傳統方法未檢測的稀有菌(如Leclercia等),驗證液滴培養在微生物資源挖掘中的不可替代性。

      D-62預處理使魔芋球莖感染斑直徑降低60%,證實其田間應用潛力。

      2.研究結論


      DREM cell通過“單細胞包被-靶向分選-功能驗證”閉環,實現高通量、低成本、高靈敏度的拮抗菌篩選,為植物病害生物防治提供新策略,尤其適用于稀有微生物資源開發。


      關于DREM cell

      DREM cell是一款集液滴生成、液滴分選、液滴微注入及液滴打印的多功能、高通量、全自動設備,其結合液滴微流控技術和介電泳分選技術,由多光路熒光檢測系統、高速顯微成像系統、自動對焦載物臺、微全分析系統、介電泳分選系統、圖像監控系統和強大的數據處理系統組成。

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      關于我們

            天木生物專注于生物育種領域的高端儀器裝備的開發與應用,致力于通過高效的突變技術和高通量篩選技術,改造提升產業傳統菌種開發模式,為生物制造產業提質增效,提升我國生物產業的核心競爭力。 致力于為行業“細胞和菌種開發與篩選效率低”、“相關裝備成本昂貴”、“產業化落地困難”等難題提供優秀的解決方案。

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